引言
在液相色谱（HPLC）和高效液相色谱-质谱联用（LC-MS）等分析技术中，流动相的质量直接影响着实验结果的准确性和可靠性。流动相的准备是实验成功的关键步骤之一。本文将详细介绍流动相使用前的关键准备步骤，帮助您提高实验的精度。
1. 选择合适的流动相溶剂
1.1 溶剂的选择
流动相溶剂的选择取决于待分析物质的性质、色谱柱的类型和实验要求。常见的流动相溶剂包括：
- 水和乙腈：适用于极性化合物的分析。
- 甲醇和乙腈：适用于中等极性化合物的分析。
- 丙酮和异丙醇：适用于非极性化合物的分析。
1.2 溶剂纯度
流动相溶剂的纯度对实验结果至关重要。通常，流动相溶剂的纯度要求如下：
- 水的纯度应达到18.2 MΩ·cm以上。
- 乙腈、甲醇、丙酮和异丙醇的纯度应达到色谱级。
2. 配制流动相
2.1 溶剂混合
根据实验要求，将不同纯度的溶剂按照一定比例混合。例如，配制含有5%乙腈的水溶液，需要将5毫升色谱级乙腈与95毫升去离子水混合。
2.2 溶剂过滤
混合后的流动相需要通过0.45 μm或0.22 μm的滤膜过滤，以去除可能存在的微粒和污染物。
2.3 气相脱气
流动相中的气体可能影响分离效果和色谱柱的寿命。因此，需要将流动相在室温下脱气至少30分钟，以去除溶解的气体。
3. 色谱柱的准备
3.1 色谱柱活化
新购买的色谱柱在使用前需要进行活化。活化方法如下：
- 将色谱柱在流动相中浸泡24小时。
- 以较高的流速（约1 mL/min）冲洗色谱柱，流速逐渐降低至正常流速。
- 以纯流动相平衡色谱柱，直至基线稳定。
3.2 色谱柱保护
在使用过程中，需要定期检查色谱柱的压力和流速，以确保色谱柱处于良好状态。如果发现压力异常升高或流速降低，可能需要更换色谱柱。
4. 流动相的储存
4.1 储存容器
流动相应储存在清洁、干燥的容器中，以防止污染和溶剂挥发。
4.2 储存条件
流动相应储存在室温下，避免阳光直射和高温环境。
结论
流动相的准备是液相色谱和LC-MS实验成功的关键步骤。通过选择合适的溶剂、配制流动相、活化色谱柱和正确储存流动相，可以确保实验结果的准确性和可靠性。遵循以上步骤，您的实验将更加精准。